分光光度計(jì)的基本工作原理是基于物質(zhì)對(duì)光(對(duì)光的波長(zhǎng))的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶。
所以,當(dāng)光色散后的光譜通過(guò)某一溶液時(shí),其中某些波長(zhǎng)的光線(xiàn)就會(huì)被溶液吸收。在一定的波長(zhǎng)下,溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系,即符合比爾定律。
T=I/Io lg(Io/I)=εcb
式中,T為透過(guò)率,Io為入射光強(qiáng)度,I為透射光強(qiáng)度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數(shù),b為溶液的光徑長(zhǎng)度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時(shí),透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
注意事項(xiàng):
1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2、使用本儀器前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查,電源接線(xiàn)應(yīng)牢固,通電也要良好,各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,然后再按通電源開(kāi)關(guān)。
3、在儀器尚未接通電源時(shí),電表指針必須于“0”刻線(xiàn)上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。